1、原理及適用范圍

    菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1 mL（g）檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù)，是常用的微生物檢測項目。菌落總數(shù)檢測板是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基，吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在檢測板上呈紅色，這樣可縮短計數(shù)時間和增強(qiáng)計數(shù)效果。本產(chǎn)品適合于各類食品及食品原料中菌落總數(shù)的測定。執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定》（GB 4789.2）。

2、操作方法

2.1  樣品處理：取樣品 25 mL（g）放入含有225 mL滅菌磷酸緩沖稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質(zhì)袋內(nèi)，制成1:10的樣品勻液，必要時用1 mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)樣品勻液pH至6.6～7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1 mL，注入含有9 mL稀釋液的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。

2.2  接種：一般食品選2～3個稀釋度進(jìn)行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進(jìn)行檢測。將菌落總數(shù)檢測板置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1 mL樣品勻液滴加到檢測板內(nèi)，迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板，讓樣品勻液均勻吸附在濾紙上，靜置10s左右，待樣品勻液完全被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。

2.3  培養(yǎng)：將檢測板疊在一起，倒置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)。一般食品培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24 h；水產(chǎn)品培養(yǎng)溫度為30℃±1℃，培養(yǎng)48 h。

3、結(jié)果判讀

     細(xì)菌在檢測板上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數(shù)適中（30～300 CFU）的檢測板進(jìn)行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（或每克）樣品中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。

4、計數(shù)原則及報告方式

4.1  若只有一個稀釋度檢測板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個檢測板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每克（或毫升）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。

4.2  若有兩個連續(xù)稀釋度的檢測板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按式(1)計算: 

                                ················ （1）

    式中：

    N——樣品中菌落數(shù)；

    ∑C——檢測板上(含適宜范圍菌落數(shù)的測試片)菌落數(shù)之和；

    n1——第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）檢測板數(shù)；

    n2——第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）檢測板數(shù)；

d——稀釋因子(第一稀釋度)。

示例：

上述數(shù)據(jù)經(jīng)“四舍五入”后，表示25000或2.5×104。

4.3  若所有的稀釋度菌落總數(shù)均大于300 CFU，則對稀釋度zui高的檢測板進(jìn)行計數(shù)，其他檢測板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以zui高稀釋倍數(shù)計算。

4.4  若所有的稀釋度菌落總數(shù)均小于30 CFU，則應(yīng)按稀釋度zui低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。

4.5 若所有的稀釋度（包括液體樣品原液）均無菌落生長，則以小于1乘以zui低稀釋倍數(shù)計算。

4.6  若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30 CFU～300 CFU之間，其中一部分小于30 CFU或大于300CFU，則以zui接近30 CFU或300 CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。

4.7 菌落總數(shù)的報告

4.7.1 菌落總數(shù)在100 CFU以內(nèi)時，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報告。

4.7.2 大于或等于100 CFU時，第三位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面的0代替位數(shù)，也可用指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。

4.7.3 若測試片上一片紅色無法計數(shù)時，則報告多不可計。

4.7.4 若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。

4.7.5 固體樣品以CFU/g為單位報告，液體樣品以CFU/mL為單位報告。

5、附加說明

5.1  菌落總數(shù)檢測板檢測結(jié)果與傳統(tǒng)平板計數(shù)瓊脂平板法符合率可達(dá)90％以上。

5.2  磷酸緩沖液稀釋液的配制與滅菌：貯存液：稱取34.0 g分析純磷酸二氫鉀（KH2PO4）溶于500 mL蒸餾水或純凈水中，用大約175 mL的1 mol/L氫氧化鈉（NaOH）溶液調(diào)節(jié)PH至7.2，用蒸餾水稀釋至1000 mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25 mL，用蒸餾水稀釋至1000 mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

5.3 生理鹽水的配制與滅菌：取8.5 g分析純氯化鈉（NaCl）溶解到1000 mL蒸餾水或純凈水中，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

5.4 注意使用過的檢測板上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。zuizuizuizuizuizuizui

1、原理及適用范圍

    菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1 mL（g）檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù)，是常用的微生物檢測項目。菌落總數(shù)檢測板是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基，吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在檢測板上呈紅色，這樣可縮短計數(shù)時間和增強(qiáng)計數(shù)效果。本產(chǎn)品適合于各類食品及食品原料中菌落總數(shù)的測定。執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定》（GB 4789.2）。

2、操作方法

2.1  樣品處理：取樣品 25 mL（g）放入含有225 mL滅菌磷酸緩沖稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質(zhì)袋內(nèi)，制成1:10的樣品勻液，必要時用1 mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)樣品勻液pH至6.6～7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1 mL，注入含有9 mL稀釋液的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。

2.2  接種：一般食品選2～3個稀釋度進(jìn)行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進(jìn)行檢測。將菌落總數(shù)檢測板置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1 mL樣品勻液滴加到檢測板內(nèi)，迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板，讓樣品勻液均勻吸附在濾紙上，靜置10s左右，待樣品勻液完全被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。

2.3  培養(yǎng)：將檢測板疊在一起，倒置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)。一般食品培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24 h；水產(chǎn)品培養(yǎng)溫度為30℃±1℃，培養(yǎng)48 h。

3、結(jié)果判讀

     細(xì)菌在檢測板上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數(shù)適中（30～300 CFU）的檢測板進(jìn)行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（或每克）樣品中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。

4、計數(shù)原則及報告方式

4.1  若只有一個稀釋度檢測板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個檢測板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每克（或毫升）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。

4.2  若有兩個連續(xù)稀釋度的檢測板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按式(1)計算: 

                                ················ （1）

    式中：

    N——樣品中菌落數(shù)；

    ∑C——檢測板上(含適宜范圍菌落數(shù)的測試片)菌落數(shù)之和；

    n1——第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）檢測板數(shù)；

    n2——第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）檢測板數(shù)；

d——稀釋因子(第一稀釋度)。

示例：

上述數(shù)據(jù)經(jīng)“四舍五入”后，表示25000或2.5×104。

4.3  若所有的稀釋度菌落總數(shù)均大于300 CFU，則對稀釋度zui高的檢測板進(jìn)行計數(shù)，其他檢測板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以zui高稀釋倍數(shù)計算。

4.4  若所有的稀釋度菌落總數(shù)均小于30 CFU，則應(yīng)按稀釋度zui低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。

4.5 若所有的稀釋度（包括液體樣品原液）均無菌落生長，則以小于1乘以zui低稀釋倍數(shù)計算。

4.6  若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30 CFU～300 CFU之間，其中一部分小于30 CFU或大于300CFU，則以zui接近30 CFU或300 CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。

4.7 菌落總數(shù)的報告

4.7.1 菌落總數(shù)在100 CFU以內(nèi)時，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報告。

4.7.2 大于或等于100 CFU時，第三位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面的0代替位數(shù)，也可用指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。

4.7.3 若測試片上一片紅色無法計數(shù)時，則報告多不可計。

4.7.4 若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。

4.7.5 固體樣品以CFU/g為單位報告，液體樣品以CFU/mL為單位報告。

5、附加說明

5.1  菌落總數(shù)檢測板檢測結(jié)果與傳統(tǒng)平板計數(shù)瓊脂平板法符合率可達(dá)90％以上。

5.2  磷酸緩沖液稀釋液的配制與滅菌：貯存液：稱取34.0 g分析純磷酸二氫鉀（KH2PO4）溶于500 mL蒸餾水或純凈水中，用大約175 mL的1 mol/L氫氧化鈉（NaOH）溶液調(diào)節(jié)PH至7.2，用蒸餾水稀釋至1000 mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25 mL，用蒸餾水稀釋至1000 mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

5.3 生理鹽水的配制與滅菌：取8.5 g分析純氯化鈉（NaCl）溶解到1000 mL蒸餾水或純凈水中，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

5.4 注意使用過的檢測板上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。zuizuizuizuizuizuizui

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